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組織滅活苗的研制(以藍耳病蜂膠苗制作為例)
1 毒液滅活 無菌采集PRRSV 陽性瀕死仔豬肺、脾、淋巴結等, 剪碎, 加適量PBS 液于高速搗碎機中勻漿, 加PBS 液稀釋成1∶10 混懸液, 凍融3次, 3000 röm in 離心, 取上清液加入0. 2% 甲醛溶液37℃滅活24 h, 期間振蕩數次, 無菌檢查合格后即為制苗病毒液, 4℃保存備用。在夏天制作時,最好用冰凍過的PBS來勻漿。
2 蜂膠純化 蜂膠1 份剪碎, 加入4 份95% 乙醇溶解, 25℃作用24 h, 冷卻離心取上清液, 以干物質計算配制成30 m göm l 溶液, 4℃保存備用。
3 疫苗制備 蜂膠乙醇溶液與甲醛滅活的病毒液等體積混合, 低速拌勻成為混懸液。無菌檢查合格即為豬繁殖障礙與呼吸道綜合征蜂膠佐劑組織滅活苗。
4 安全試驗 未免疫豬繁殖障礙與呼吸道綜合征的母豬所產1 日齡健康仔豬4 頭, 接種研制的組織滅活苗5 m lö頭, 觀察2 周仔豬全部健活; 同時分別接種懷孕80、85、90 d 健康母豬3 頭, 無流產現象, 足月分娩無死胎、木乃伊胎及弱仔。
5 保護力試驗 PRRSV 陰性20 日齡健康仔豬20 頭, 隨機分為2 組, 每組10 頭。作2 個處理, 第一組接種組織滅活苗4 m lö頭, 第2 組接種生理鹽水4 m lö頭。觀察保護效果。 |
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